ZQP1910 一步法多重RT-qPCR预混液
产品编码：ZQP1910
储存温度：-20 ± 5℃保存
有效期：2年
- 产品描述
雅心一步法多重RT-qPCR预混液适用于RNA样本或RNA/DNA混合样本的定量检测。在单管内，RNA首先通过逆转录酶逆转录为cDNA，然后通过DNA聚合酶扩增，实现定量RT-PCR检测。该预混液将RT-qPCR所需的缓冲液、Reverse Transcriptase、 HotStart Taq DNA polymerase (antibody)和RNase Inhibitor整合至一管中，加样方便、简单，无需额外的开盖/移液操作，提高了检测通量，降低了污染风险。同时引入dUTP/UDG防污染系统，避免气溶胶等污染，Heat-labile UDG在逆转录（50-55℃）时迅速失活，不会影响后续RT-qPCR性能。4X Multiple RT-qPCR Master Mix中包含优化的缓冲体系和酶，适用于多种检测方法，同时适用于多重和快速体系。
- 产品组分
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组分名称 |
包装规格 |
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ZQP19101mL |
ZQP19105mL |
ZQP191010mL |
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4X Multiple RT-qPCR Master Mix *a |
1 mL |
5 × 1 mL |
10 mL |
注意：
- 包含RT-qPCR缓冲液、反转录酶、热启动Taq DNA聚合酶、RNase抑制剂和UDG。
- 质量控制
- 无色澄清液体。
- 无核酸内切酶、外切酶和RNase残留。
- 本产品经RT-qPCR检测，通过功能性验证。
- 注意事项
- 4X Multiple RT-qPCR Master Mix是4X，比大多数Master Mix都要粘稠，操作前请确保充
- 分混匀并瞬时离心至反应管底部。
- 所用试剂、耗材以及实验操作区需洁净，避免污染。
- RT-qPCR实验流程（举例）
- 配制如下反应混合液
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组分 |
20 μL体系 |
25 μL体系 |
50 μL体系 |
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Nuclease-free Water |
To 20 μL |
To 25 μL |
To 50 μL |
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4X Multiple RT-qPCR Master Mix |
5 μL |
6.25 μL |
12.5 μL |
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Primer/Probe Mix |
1 μL |
1.25 μL |
2.5 μL |
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模板 |
X μL |
X μL |
X μL |
注意：
- 推荐引物终浓度0.3 μM，可根据实验需求在0.1 - 1 μM范围内调整或根据客户需求添加。
- 推荐探针终浓度0.1 μM，可根据实验需求在0.05 - 0.3 μM范围内调整或根据客户需求添加。
- 如需要多重RT-qPCR反应，则根据需求进行引物浓度和模板浓度优化。
- 反应程序
推荐一（三步法）
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温度 |
时间 |
循环数 |
目的 |
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50℃ *a |
10 min |
1 |
逆转录 |
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95℃ *b |
2 min |
1 |
预变性 |
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95℃ *b |
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45 cycles |
变性 |
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55-65℃ |
20 sec |
退火 |
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72℃ |
30-60 sec |
延伸 |
推荐二（两步法）
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温度 |
时间 |
循环数 |
目的 |
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50℃ *a |
15 min |
1 |
逆转录 |
|
95℃ *b |
1 min |
1 |
预变性 |
|
95℃ *b |
|
45 cycles |
变性 |
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60℃ |
30-60 sec |
退火/延伸 |
注意：
- 如模板结构比较复杂，如GC含量较高，可将逆转录温度提高到55℃，有助于提高逆转录效率和灵敏度。
- 如模板结构比较复杂，可适当增加预变性和变性时间。
不同PCR仪器反应条件略有不同，首次使用时请进行条件优化和确认。
