REK10 重组肠激酶
重组肠激酶
Recombinant Enterokinase
产品编码: REK10
CAS: 9017-74-8
EC: 3.4.21.9
来源：牛肠激酶，重组大肠杆菌表达
储存温度：-20℃或以下
蛋白序列：氨基酸序列与牛肠激酶轻链一致。
1.产品简介
雅心重组牛肠激酶是一种高纯度的重组牛肠激酶轻链片段。该酶经HPLC纯化，纯度高，特异性高，不含其他蛋白酶。肠激酶可以切割含有四个天冬氨酸的赖氨酸羧基端肽键：天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 赖氨酸（DDDDK）。可以在较宽pH范围（4.5-9.5）和较宽温度范围内有效切割融合蛋白。肠激酶可去除位于蛋白质N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合标签。
2.产品特性
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来源 |
重组大肠杆菌 |
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外观 |
澄清、无色至淡黄色液体 |
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活性 |
≥ 5.0 U/µL |
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纯度（蛋白电泳） |
单一主条带 |
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电泳（分子量） |
25.8 ±2.6 kDa |
单位定义：1 U定义为在25℃，12~16小时之内，将0.5 mg保存于25 mM Tris-HCl 8.0 缓冲液中的融合蛋白切割95%所需的酶量。
3.推荐使用方法
- 25℃酶切条件：
按照酶活性定义，酶切条件举例：
25 mM Tris-HCl 8.0体系中：
融合蛋白 0.1-1 mg/mL（蛋白总量50-100 µg）
重组EK 0.1-0.2 U
25℃过夜酶切，或完全酶切需16-24小时，用SDS-PAGE检测酶切效果。
- 4℃低温酶切条件：
4℃能对底物进行有效酶切，但需要将酶切时间延长至48-64小时，或增加2-3倍酶量。
- 酶切优化和放大
优化：可以对酶切条件进行优化，例如缓冲液pH，融合蛋白浓度，EK的量，以及酶切时间，使融合蛋白能在稳定条件下被酶切，用SDS-PAGE检测酶切效果。
放大：选择优化后的反应条件，按该条件等比例放大，用SDS-PAGE检测酶切效果。
去除重组肠激酶的方法：使用胰蛋白酶抑制剂亲和层析（例如sigma T0637）去除重组肠激酶。
注意：不建议37℃条件下酶切，可能会有非特异性酶切出现。
4.常见影响肠激酶活性的因素
在＞200 mM咪唑，或＞200 mMNaCl，或＞5%甘油，酶切效果受影响。可参照以下推荐方法进行酶切：
- 为获得理想酶切结果，请将样品透析到25 mM Tris-HCl 8.0缓冲液中，再进行酶切。
- 若不便透析，可将样品稀释，咪唑含量在100 mM以下，NaCl浓度在50 mM以下，甘油浓度小于5%以下进行酶切，酶的用量与蛋白的比例不变（即1U酶切500µg蛋白）。
- 如果样品溶液中含有上述成分中的一种或多种，且不便去除，此时适当增加酶量或延长酶切时间，也可达到较好酶切效果。
5.储存和运输稳定性
酶液储存稳定性：-20℃，24个月稳定；25℃，一周内，无活性损失。缓冲体系：50 mM Tris-HCl，pH 8.0，250 mM NaCl，2 mMCa2+，50%甘油。
酶液反复冻融稳定性：反复冻融5次，无活性损失。
运输稳定性：蓝冰保温运输，稳定。
