ZQP1410 直扩RT-qPCR试剂盒（Ab,含UDG）
直扩RT-qPCR试剂盒（Ab,含UDG）
Direct RT-qPCR Probe Kit (Ab, UDG plus)
产品货号：ZQP1410-01/ZQP1410-02/ZQP1410-03
产品编码：ZQP1410
储存温度：-20 ± 5℃保存
有效期：2年
- 产品描述
雅心直扩RT-qPCR试剂盒（Ab，含UDG）适用于未纯化的样本进行RT-qPCR扩增。本产品具有很强的抗抑性，无需核酸纯化步骤，可使用咽拭子和口腔拭子的原始样本作为模板直接进行一步法RT-qPCR荧光检测。本产品将RT-qPCR所需的Reverse Transcriptase、HotStart Taq DNA polymerase (antibody)和RNase Inhibitor整合至一管中，加样方便、简单，无需额外的开盖/移液操作，提高了检测通量，降低了污染风险。同时引入dUTP/UDG防污染系统，避免气溶胶等污染，Heat-labile UDG在逆转录（50-55℃）时迅速失活，不会影响后续RT-qPCR性能。2X Direct RT-qPCR U+ Buffer中包含dNTPs和Mg2+，经优化后适用于多种检测方法。
- 产品组分
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组分名称 |
包装规格 |
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ZQP1410-01 （100 rxns） |
ZQP1410-02 （1000 rxns） |
ZQP1410-03 （5000 rxns） |
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2X Direct RT-qPCR U+ Buffer *a |
1.3 mL |
13 mL |
65 mL |
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Direct RT-qPCR Enzyme Mix *b |
250 μL |
2.5 mL |
12.5 mL |
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Nuclease-free Water |
1.3 mL |
13 mL |
65 mL |
注意：
- 包含dNTPs（含dUTP）和Mg2+。
- 包含Reverse Transcriptase、HotStart Taq DNA polymerase (antibody)、RNase Inhibitor和Heat-labile UDG。
- 质量控制
- 无核酸内切酶、外切酶和RNase残留。
- 注意事项
- 样品使用前请混匀并瞬时离心至反应管底部。
- Enzyme Mix中含有高浓度的甘油，吸取时需注意准确吸取。
- 所用试剂、耗材以及实验操作区需洁净，避免污染。
- RT-qPCR实验流程（举例）
- 配制如下反应混合液
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组分 |
25 μL体系 |
50 μL体系 |
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Nuclease-free Water |
To 25 μL |
To 50 μL |
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2X Direct RT-qPCR U+ Buffer |
12.5 μL |
25 μL |
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Direct RT-qPCR Enzyme Mix |
2.5 μL |
5 μL |
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Primer/Probe Mix |
1 μL |
2 μL |
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模版 |
X |
X |
注意：
- 推荐引物终浓度0.3 μM，可根据实验需求在0.1 - 1 μM范围内调整或根据客户需求添加。
- 推荐探针终浓度0.1 μM，可根据实验需求在0.05 - 0.3 μM范围内调整或根据客户需求添加。
- 如需要多重RT-qPCR反应，则根据需求进行引物浓度和模板浓度优化。
- 咽拭子和口腔拭子的加样量推荐不超过总体积的20%，根据生物样本的不同和样本保存液的不同，加样量可能存在差异，可根据需求确定反应体系中的最佳加样量。
- 反应程序
推荐一（标准程序）
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温度 |
时间 |
循环数 |
目的 |
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50℃ *a |
15 min |
1 |
逆转录 |
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95℃ *b |
1 min |
1 |
预变性 |
|
95℃ *b |
|
45 cycles |
变性 |
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60℃ |
60 sec |
退火/延伸 |
推荐二（快速程序）
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温度 |
时间 |
循环数 |
目的 |
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50℃ *a |
5 min |
1 |
逆转录 |
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95℃ *b |
30 sec |
1 |
预变性 |
|
95℃ *b |
|
45 cycles |
变性 |
|
60℃ |
15-30 sec |
退火/延伸 |
注意：
- 如模板结构比较复杂，如GC含量较高，可将逆转录温度提高到55℃，有助于提高逆转录效率和灵敏度。
- 如模板结构比较复杂，可适当增加预变性和变性时间。
不同PCR仪器反应条件略有不同，首次使用时请进行条件优化和确认。
