ZQP0910 U-多重qPCR预混液（含UDG）
Cat. No.：ZQP0910
储存温度：-20 ± 5℃保存
复验期：18个月
1. 产品描述
雅心U+多重qPCR预混液（含UDG）适用于DNA模板的定量检测。该预混液以2X 形式提供，将酶和缓冲液整合至一管中，只需额外加入引物/探针、模板即可，加样方便、简单，无需额外的开盖/移液操作，提高了检测通量，降低了污染风险。同时引入dUTP/UDG防污染系统，避免气溶胶等污染。该预混液中所用的HotStart Taq DNA polymerase (antibody)是Taq和抗Taq抗体经最佳比例混合而成的热启动TaqDNA聚合酶，在70℃时仍处于完全封闭状态，可在样品配制和体系升温阶段抑制由引物的非特异性退火或引物二聚体引起的非特异性扩增。优化的qPCR体系可兼容多重靶标的检测，具有极高的扩增灵敏度和特异性，且同时具有良好的杂质耐受性能。
适用于动物、植物和微生物DNA模板的qPCR检测。
2. 产品组分
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组分 |
ZQP0910-01 （100 rxns） |
ZQP0910-02 （500 rxns） |
ZQP0910-03 （2000 rxns） |
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2X U+多重qPCR预混液 *a |
1.25 mL |
5 × 1.25 mL |
2 × 12.5 mL |
注意*：
a. 包含dNTPs (dUTP plus)、Mg2+、HotStart Taq DNA polymerase (antibody)和Heat-labile UDG等。
3. 质量控制
Ø 无核酸内切酶、外切酶和RNase残留。
4. 注意事项
Ø 样品使用前请混匀并瞬时离心至反应管底部。
Ø 如需多次使用，请首次融化后分装保存，避免反复冻融。
Ø 所用试剂、耗材以及实验操作区需洁净，避免污染。
5.实验流程（举例）
（1）配制如下反应混合液
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组分 |
体积 |
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Nuclease-free Water |
To 25 μL |
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2X U+多重qPCR预混液 |
12.5 μL |
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Primer/Probe Mix |
1 μL |
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模板DNA |
X μL |
注意：
1）推荐引物终浓度0.3 μM，可根据实验需求在0.1 - 1 μM范围内调整或根据客户需求添加。
2）推荐探针终浓度0.1 μM，可根据实验需求在0.05 - 0.25 μM范围内调整或根据客户需求添加。
3）模板加入体积不易过少，如果模板浓度较高，推荐稀释后加入，可提高实验的重复性。
4）根据所用qPCR仪的需求，选择是否加入ROX校准染料。
（2）反应程序
推荐一（标准程序）
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温度 |
时间 |
循环数 |
目的 |
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37℃ |
2 min |
1 |
降解含U模板 |
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95℃ *a |
30 sec |
1 |
预变性 |
|
95℃ *a |
10 sec |
45 cycles |
变性 |
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60℃ |
60 sec |
退火/延伸 |
推荐二（快速程序）
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温度 |
时间 |
循环数 |
目的 |
|
37℃ |
2 min |
1 |
降解含U模板 |
|
95℃ *a |
10 sec |
1 |
预变性 |
|
95℃ *a |
1-5 sec |
45 cycles |
变性 |
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60℃ |
20-30 sec |
退火/延伸 |
注意*：
a. 如模板结构比较复杂，如GC含量较高，可适当增加预变性和变性时间，有助于提高扩增效率和灵敏度。
不同PCR仪器反应条件略有不同，首次使用时请进行条件优化和确认。
