ZQP0310 一步法RT-qPCR试剂盒（Ab, 含UDG）
Cat. No.：ZQP0310
储存温度：-20 ± 5℃保存
复验期：2年
1.产品描述
雅心One-Step RT-qPCR Probe Kit适用于RNA样品或RNA/DNA混合样品的定量检测。在单管内，RNA首先通过逆转录酶逆转录为cDNA，然后通过DNA聚合酶扩增，实现定量PCR（qPCR）检测。该预混液将RT-qPCR所需的Reverse Transcriptase、 HotStart Taq DNA polymerase (antibody)和RNase Inhibitor整合至一管中，加样方便、简单，无需额外的开盖/移液操作，提高了检测通量，降低了污染风险。同时引入dUTP/UDG防污染系统，避免气溶胶等污染，Heat-labile UDG在逆转录（50-55℃）时迅速失活，不会影响后续RT-qPCR性能。提供的2X One-Step U+ Buffer中包含dNTPs（dUTP plus）和Mg2+，经优化后适用于多种检测方法。
2.产品组分
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组分 |
ZQP0310-01 （100 rxns） |
ZQP0310-02 （1000 rxns） |
ZQP0310-03 （5000 rxns） |
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2X One-Step U+ Buffer *a |
1.3 mL |
13 mL |
65 mL |
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One-Step Enzyme Mix Ab *b |
130 μL |
1.3 mL |
6.5 mL |
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Nuclease-free Water |
1.3 mL |
13 mL |
65 mL |
注意*：
a.包含dNTPs（dUTP plus）和Mg2+。
b.包含Reverse Transcriptase、HotStart Taq DNA polymerase (antibody)、RNase Inhibitor和Heat-labile UDG。
3.质量控制
· 无核酸内切酶、外切酶和RNase残留。
· 功能检测：可检测pg级的RNA样品。
4.注意事项
· 样品使用前请混匀并瞬时离心至反应管底部。
· Enzyme Mix中含有高浓度的甘油，吸取时需注意准确吸取。
· 所用试剂、耗材以及实验操作区需洁净，避免污染。
5. RT-qPCR实验流程（举例）
（1）配制如下反应混合液
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组分 |
体积 |
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Nuclease-free Water |
To 25 μL |
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2X One-Step U+ Buffer |
12.5 μL |
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One-Step Enzyme Mix Ab |
1.25 μL |
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Primer/Probe Mix |
1 μL |
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模板DNA |
X（Total RNA：1 pg - 1 μg） |
注意：
1）推荐引物终浓度0.3 μM，可根据实验需求在0.1 - 1 μM范围内调整或根据客户需求添加。
2）推荐探针终浓度0.1 μM，可根据实验需求在0.05 - 0.25 μM范围内调整或根据客户需求添加。
3）如需要多重RT-qPCR反应，则根据需求进行引物浓度和模板浓度优化。
（2）反应程序
推荐一（标准程序）
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温度 |
时间 |
循环数 |
目的 |
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50℃ *a |
15 min |
1 |
逆转录 |
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95℃ *b |
20 sec |
1 |
预变性 |
|
95℃ *b |
10 sec |
45 cycles |
变性 |
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60℃ |
60 sec |
退火/延伸 |
推荐二（快速程序）
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温度 |
时间 |
循环数 |
目的 |
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50℃ *a |
5 min |
1 |
逆转录 |
|
95℃ *b |
10 sec |
1 |
预变性 |
|
95℃ *b |
5-10 sec |
45 cycles |
变性 |
|
60℃ |
20-30 sec |
退火/延伸 |
注意*：
a.如模板结构比较复杂，如GC含量较高，可将逆转录温度提高到55℃，有助于提高逆转录效率和灵敏度。
b.如模板结构比较复杂，可适当增加预变性和变性时间。
不同PCR仪器反应条件略有不同，首次使用时请进行条件优化和确认。
