Cat. No.:ZP0910
储存温度:-20 ± 5℃保存
复验期:2年
1. 产品描述
雅心Taq 2X Master Mix (Dye plus)是经过优化的即用型2X预混液,包含Taq DNA polymerase、dNTPs、Mg2+和优化的缓冲体系,适合于常规PCR,模板可以是纯DNA溶液、菌落和cDNA产物等,是5 kb或更短模板的标准PCR的理想工具。使用该预混液只需额外加入引物、模板即可,加样方便、简单,无需额外的开盖/移液操作,提高了检测通量和结果的重现性。本产品中含有溴酚蓝染料,反应结束后可以直接电泳,使用方便。本产品中含有优良的保护剂,反复冻融5次和4℃存放3个月不影响使用,如长期保存,请置于-20℃。PCR产物的3'端带有A突出端,适用于T载体克隆。
2. 产品组分
组分 |
ZP0910-01 |
ZP0910-02 |
ZP0910-03 |
Taq 2X Master Mix (Dye plus) |
1 mL |
10 × 1 mL |
50 × 1 mL |
3. 质量控制
· 酶原料无核酸内切酶、外切酶和RNase残留。
4. 实验流程(举例)
(1)配制如下反应混合液
组分 |
体积 |
Nuclease-free Water |
To 50 μL |
Taq 2X Master Mix (Dye plus) |
25 μL |
引物1 (10 μM) |
2 μL |
引物2 (10 μM) |
2 μL |
模板DNA |
X μL |
注意:
1)基因组DNA模板使用量推荐10-200 ng;质粒DNA模板使用量推荐0.1-10 ng。
2)PCR反应体系在冰上配制可以减少在反应准备阶段发生的非特异扩增,有助于提高特异性。
(2)反应程序
推荐一(标准程序)
温度 |
时间 |
循环数 |
目的 |
95℃ *a |
5 min |
1 |
预变性 |
95℃ *a |
30 sec |
30-35 |
变性 |
55-65℃ *b |
20 sec |
退火 |
|
72℃ *c |
30-60 sec/kb |
延伸 |
|
72℃ |
10 min |
|
终延伸 |
注意*:
a. 模板结构复杂 (如GC含量较高),可适当增加预变性和变性时间,有助于提高扩增效率。
b. 退火温度请参考引物的理论Tm值或者根据软件推荐,如需要可以3℃为间隔进行测试,寻找最佳的退火温度。
c. 通常,Taq酶的延伸时间为60 sec/kb,本产品经优化后可以缩短延伸时间至30 sec/kb。
不同PCR仪器反应条件略有不同,首次使用时请进行条件优化和确认。