ZP0702 反转录酶II
Cat.No.：ZP0702
来源：基因工程生产，大肠杆菌表达
储存温度：-20 ± 5℃保存
复验期：2年
1.产品描述
莫洛尼氏鼠白血病病毒（M-MuLV）反转录酶是一种RNA介导的DNA聚合酶。该酶能以 RNA或单链DNA为模板由引物起始合成一条互补的DNA链。雅心Reverse Transcriptase II由克隆有 Reverse Transcriptase 突变体编码基因的重组大肠杆菌生产，通过基因重组技术使RNase H活性失活，延伸能力增强，热稳定性提高，可耐受55℃的反应温度。
适用于动植物和微生物RNA反转录反应、cDNA文库的构建以及RT-PCR等反应。
2.产品组分
|
组分 |
ZP0702-01（4000 U） |
ZP0702-02（10000 U） |
|
Reverse Transcriptase II (200 U/μL) |
20 μL |
50 μL |
|
5X RT Reaction Buffer |
500 μL |
500 μL |
3.活性定义
1单位（U）指以 poly（rA）为模板、oligo（dT）为引物，在37℃条件下，10分钟内催化1 nmol的dTTP掺入形成酸不溶物所需要的酶量。
4.质量控制
· 无核酸内切酶和外切酶残留。
· 无RNase残留。
· 200 U本产品经qPCR检测， E. coli基因组残留不高于10拷贝。
5.注意事项
· 避免RNase污染：保持实验区域洁净；操作时穿戴干净的手套、口罩；所用试剂和耗材均需保证RNase free。
· 在冰上配制反应液防止RNA降解。
6.操作流程
第一链cDNA合成反应（标准流程）
（1）RNA模板变性：有助于打开二级结构，可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。
|
组分 |
体积 |
|
RNase-free ddH2O |
To 10 μL |
|
Oligo(dT)18 (50 μM) |
2 μL |
|
or Random Primers (60 μM) |
|
|
or Gene Specific Primers (2 μM) |
|
|
total RNA |
1 ng - 1 μg |
|
or poly A+ RNA |
50 pg - 0.1 μg |
|
dNTP Mix (10 mM) |
1 μL |
65℃加热5 min，立即置于冰水浴骤冷2 min，瞬时离心后加入下表反应体系。
