Cat. No.:MR0202
来源:重组大肠杆菌表达
储存温度:-20 ± 5℃
复验期:2年
1.产品简介
雅心T7 RNA Polymerase由克隆有噬菌体T7 RNA聚合酶编码基因的重组大肠杆菌生产,对T7启动子有高度的特异性,是一种以DNA为模板合成互补RNA的5'→3' RNA聚合酶。本产品可用双链线性平头末端或5'突出末端DNA为模板,如线性化的质粒或PCR产物。用于制备放射性标记的RNA探针;用于体外转录合成功能性RNA;以含Cap类似物的引物合成加帽的mRNA。
2.产品特性
来源 |
重组大肠杆菌表达 |
外观 |
无色澄清液体 |
活性 |
300 U/μL |
纯度 |
≥95% |
酶残留 |
无核酸外切酶、核酸内切酶、RNase残留 |
1单位(U)指在37 ℃条件下,1小时内将1 nmol的ATP掺入酸不溶物所需要的酶量。
3.产品优势
(1)无动物源性:重组生产,生产过程不使用任何动物源原料。
(2)质量稳定:批量生产,可保证稳定连续的批次生产;产品批次间无差异,质量稳定。
(3)质量文件完整:按客户需求,可提供相关法规支持文件。
4.产品用途
(1)在体外转录中合成单链RNA,特别是用于mRNA合成。
(2)合成高特异性RNA探针、siRNA前体等。
(3)利用帽类似物合成带帽RNA。
5.应用举例
(1)配制如下反应混合液
组分 |
用量 |
终浓度 |
10X Transcription Buffer |
2 μL |
1X |
NTP(100 mM each) |
1 μL each |
5 mM |
T7 RNA Polymerase(50 U/μL) |
1 μL |
15 U/μL |
RNase Inhibitor(40 U/μL) |
1 μL |
2 U/μL |
Template DNA |
0.1 - 1 μg |
|
RNase-free ddH2O |
To 20 μL |
|
(2)根据反应情况,调整以下参数:
· T7 RNA 聚合酶使用浓度可依据需求相对应调整,RNase Inhibitor可在1-2 U/μL之间调整。
· 可依据需求,相对应调整NTP和镁离子的浓度。
· RNase Inhibitor可购买本公司相应产品(货号MR0110)。
· 可以加入无机焦磷酸酶以提高产率(货号MR04)。
(3) 37℃反应1-2 h(可根据需求,适当延长反应时间)。
6.注意事项
(1)建议室温下配制反应体系。注意先加入ddH2O、Buffer、NTP和T7 RNA Polymerase,DNA模板可最后加入。
(2)使用无RNase管和移液枪;应戴手套。
(3)转录效率和孵化时间:不同模板的产量会因模板的序列、结构、长度、纯度以及特定RNA聚合酶启动子的序列和长度而有所不同。推荐的反应条件可适用于大多数模板的体外转录,对于某些模板可通过延长反应时间,增加模板的用量来提高产率。
7.订购信息
产品名称 |
货号 |
规格 |
储存条件 |
复验期 |
T7 RNA Polymerase(300 U/μL) 10X Transcription Buffer(1 mL) |
MR0202-01 |
30000 U(100 μL) |
-20±5℃ |
2年 |
T7 RNA Polymerase(300 U/μL) 10X Transcription Buffer(2 x 1 mL) |
MR0202-02 |
150000 U(500 μL) |
-20±5℃ |
2年 |
注:需要高浓度或大规格可定制。