Cat. No.:MR0203
来源:重组大肠杆菌表达
储存温度:-20 ± 5℃
复验期:2年
1、产品简介
雅心T7 RNA Polymerase由克隆有噬菌体T7 RNA聚合酶编码基因的重组大肠杆菌生产,对T7启动子有高度的特异性,是一种以DNA为模板合成互补RNA的5'→3' RNA聚合酶。本产品可用双链线性平头末端或5'突出末端DNA为模板,如线性化的质粒或PCR产物。用于制备放射性标记的RNA探针;用于体外转录合成功能性RNA;以含Cap类似物的引物合成加帽的mRNA。
2、产品特性
来源 |
重组大肠杆菌表达 |
外观 |
无色澄清液体 |
活性 |
3 KU/μL |
纯度 |
≥95% |
酶残留 |
无核酸外切酶、核酸内切酶、RNase残留 |
宿主细胞DNA残留 |
≤100 pg/mg |
宿主细胞蛋白残留 |
≤50 ppm |
1单位(U)指在37 ℃条件下,1小时内将1 nmol的ATP掺入酸不溶物所需要的酶量。
3、产品优势
1.无动物源性:重组生产,生产过程不使用任何动物源原料。
2.质量稳定:批量生产,可保证稳定连续的批次生产;产品批次间无差异,质量稳定。
3.质量文件完整:按客户需求,可提供相关法规支持文件。
4、产品用途
1.在体外转录中合成单链RNA,特别是用于mRNA合成。
2.合成高特异性RNA探针、siRNA前体等。
3.利用帽类似物合成带帽RNA。
5、应用举例
1.配制如下反应混合液
组分 |
用量 |
终浓度 |
10X Transcription Buffer |
2 μL |
1X |
NTP (100 mM each) |
2 μL each |
10 mM |
T7 RNA Polymerase (High Concentration) |
1 μL |
150 U/μL |
RNase Inhibitor (40 U/μL) |
0.5 μL |
1 U/μL |
Pyrophosphatase, Inorganic (0.1 U/μL) |
0.5 μL |
0.0025 U/μL |
Template DNA |
0.1 - 1 μg |
|
RNase-free ddH2O |
To 20 μL |
|
1.根据反应情况,调整以下参数:
· T7 RNA 聚合酶使用浓度可依据需求相对应调整,RNase Inhibitor可在1-2 U/μL之间调整,Pyrophosphatase,Inorganic可在0.001-0.005 U/μL之间调整。
· 可依据需求,相对应调整NTP和镁离子的浓度。
· RNase抑制剂(RNase Inhibitor)可购买本公司相应产品(Cat. No.: MR0110)。
· 可以加入无机焦磷酸酶(Pyrophosphatase,Inorganic)以提高产率(Cat. No.: MR04)。
· 37℃反应1-2 h(可根据需求,适当延长反应时间)。
6、注意事项
建议室温下配制反应体系。注意先加入RNase-free ddH2O、10X Transcription Buffer、NTP和T7 RNA Polymerase,DNA模板可最后加入。
使用DNase-free、RNase-free低吸附管;操作过程中应佩戴手套、口罩等。
转录效率和孵化时间:不同模板的产量会因模板的序列、结构、长度、纯度以及特定RNA聚合酶启动子的序列和长度而有所不同。推荐的反应条件可适用于大多数模板的体外转录,对于某些模板可通过延长反应时间,增加模板的用量来提高产率。
7、订购信息
产品名称 |
货号 |
规格 |
储存条件 |
复验期 |
T7 RNA Polymerase (High Concentration) 10X Transcription Buffer (250 μL) |
MR0203-01 |
300 KU (100 μL) |
-20±5℃ |
2年 |
T7 RNA Polymerase (High Concentration) 10X Transcription Buffer (1.2 mL×2) |
MR0203-02 |
3 MU (1 mL) |
注:需要大规格可定制。