ZP0704 反转录酶Ⅱ，无甘油
产品编码：ZP0704
来源：基因工程生产，大肠杆菌表达
储存温度：-20 ± 5℃
有效期：1年
- 产品描述
雅心反转录酶II，无甘油产品是通过基因工程技术改造得到的全新逆转录酶，与野生型相比，其转录速度更快，延伸能力增强，热稳定性提高，可耐受55℃的反应温度。本产品中核酸酶、宿主DNA残留量极低，适用于开发预混RT-qPCR试剂。此外，本产品不含甘油，可用于配制冻干试剂。
- 产品组分
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组分 |
包装规格 |
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10 KU （ZP070410KU） |
200 KU （ZP0704200KU） |
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Reverse Transcriptase Ⅱ, Glycerol-free (200 U/μL) |
50 μL |
1 mL |
- 注意事项
- 避免RNase污染：保持实验区域洁净；操作时穿戴干净的手套、口罩；所用试剂和耗材均需保证RNase-free。
- 在冰上配制反应液防止RNA降解。
- 融化后放置于2-8℃，避免冻融。
- 操作流程
一步法RT-qPCR
- 配制如下反应混合液
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组分 |
25 μL体系 |
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Nuclease-free Water |
To 25 μL |
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2X One-Step RT-qPCR Buffer |
12.5 μL |
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HotStart Taq DNA Polymerase, Glycerol-free (10 U/μL) |
1 μL |
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Reverse Transcriptase Ⅱ, Glycerol-free (200 U/μL) |
0.1 μL |
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RNase Inhibitor, Glycerol-free (100 U/μL) |
0.1 μL |
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Primer/Probe Mix |
1 μL |
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模板 |
X μL |
注意：
- 推荐引物终浓度0.3 μM，可根据实验需求在0.1 - 1 μM范围内调整或根据客户需求添加。
- 推荐探针终浓度0.1 μM，可根据实验需求在0.05 - 0.3 μM范围内调整或根据客户需求添加。
- 如需要多重RT-qPCR反应，则根据需求进行引物浓度和模板浓度优化。
- 反应程序
推荐一（标准程序）
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温度 |
时间 |
循环数 |
目的 |
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42-55℃ |
15 min |
1 |
逆转录 |
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95℃ |
1 min |
1 |
预变性 |
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95℃ |
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45 cycles |
变性 |
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60℃ |
60 sec |
退火/延伸 |
推荐二（快速程序）
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温度 |
时间 |
循环数 |
目的 |
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42-55℃ |
5 min |
1 |
逆转录 |
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95℃ |
30 sec |
1 |
预变性 |
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95℃ |
|
45 cycles |
变性 |
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60℃ |
15-30 sec |
退火/延伸 |
注意：
- 如模板结构比较复杂，如GC含量较高，可将逆转录温度提高到55℃，有助于提高逆转录效率和灵敏度。
- 如模板结构比较复杂，可适当增加预变性和变性时间。
- 可根据客户优化后的条件进行调整。
不同PCR仪器反应条件略有不同，首次使用时请进行条件优化和确认。
