产品规格 | 100ug;1mg;2mg |
CAS:66676-43-5 EC:3.4.21.19
【V8蛋白酶|产品简介】
酶切位点:V8蛋白酶属于丝氨酸蛋白酶家族,能特异水解谷氨酸(Glutamic acid、E)或天冬氨酸(Aspartic acid、D)残基羧基侧肽键。在pH 7.8的NH4HCO3和pH 4.0的CH3COONH4缓冲液中识别并切割Glu羧基端肽键,在pH 7.8的磷酸盐缓冲液中识别并切割Glu或Asp羧基端肽键,且对Glu的水解速率高于Asp。
产品应用:在进行蛋白质酶切测序、肽图谱分析和肽质量指纹图谱分析中使用时,可以单独使用或与其他蛋白酶混合使用。
基本特性:V8蛋白酶在pH4.0-10.0之间均有活性,最适pH为8.0-8.5。V8蛋白酶的抑制剂有二异丙基氟磷酸(DFP)、α2-巨球蛋白和Nα-P-甲苯磺酰基-L-赖氨酸氯甲基酮(TLCK)。
【V8蛋白酶|产品特性】
来源 | 重组大肠杆菌 |
产品外观 | 白色、类白色、类黄色粉末 |
比活 | ≥5.0 U/mg pro. |
纯度(蛋白电泳) | 单一主条带 |
分子量(蛋白电泳) | 24.0±2.4 kDa |
备注:在25℃,pH7.8的条件下,每分钟催化底物(Z-Phe-Leu-Glu-4-nitranilide)生成1μmol对硝基苯胺(4-nitroaniline)所需要的酶量为一个酶活性单位。
【V8蛋白酶|使用方法】
使用前注意:可按使用量分装以最大限度避免污染或自切。
目的蛋白溶解:用酶切buffer溶解目的蛋白,例如25-50 mM NH4HCO3 pH 7.8,若溶解度不好对目的蛋白变性,添加尿素、SDS、DTT或加热。尿素和SDS对V8蛋白酶的影响见表一。
酶切:V8蛋白酶和目的蛋白推荐比例为1/20-1/100(W/W),25℃或37℃酶切2-18h。
表一:V8蛋白酶在含有不同浓度变性剂,尿素25℃2h,SDS25℃12h的稳定性
(注:V8蛋白酶0.5mg/ml,50mM Tris-HCl pH8.0)
变性剂 | 浓度 | 残余酶活 |
不添加 | 0 | 100% |
尿素 | 2M | 95% |
5M | 12% | |
8M | 0 | |
SDS | 0.10% | 90% |
0.50% | 80% | |
1% | 50% |
应用举例:重组V8酶切胰岛素
100 μl胰岛素溶液+198 μl 0.4 M Tris-HCl pH 8.0+60 μl 0.1%V8蛋白酶液+超纯水补至400 μl。37 ℃水浴反应2 h,加6 μl磷酸溶液终止反应,C18柱分析:
A:酶切之前
B:酶切之后
【V8蛋白酶|储存运输】
储存稳定性:重组V8蛋白酶冻干粉存于2-8℃,24个月稳定;
溶解后稳定性:用水或50 mM Tris-HCl pH 8.0溶解以后存于-20℃ 以下(1mg/ml),6个月稳定;用水或50 mM Tris-HCl pH 8.0溶解以后存于4℃(1mg/ml,无菌),2个月稳定;用50 mM Tris-HCl pH 8.0溶解以后存于25℃或37℃(0.5mg/ml)12h,活性可维持85%以上;溶解后溶液可反复冻融10次无活性损失。
运输稳定性:蓝冰保温运输,活性稳定。
【V8蛋白酶|产品优势】
序列分析纯胰蛋白酶:特异性高,稳定性好。
无动物源性:重组生产,无外源性的病毒污染,生产过程不使用任何动物源原料。
质量稳定:批量生产,可保证稳定连续的批次生产;产品批次间无差异,质量稳定。
纯度高:比活高;宿主蛋白残留小于生物制品限度要求。
冻干粉:易于储存和运输。
符合法规要求:生产设备和生产环境符合相关法规要求,生产过程完全遵循NSF ISO 9001:2015质量体系并符合GMP指导原则。
质量文件完整:按客户需求,可提供相关法规支持文件。
【V8蛋白酶|相关产品】
重组肠激酶;序列分析纯羧肽酶B;序列分析纯胰蛋白酶;序列分析纯糜蛋白酶。