CAS:9014-74-8 EC:3.4.21.9
【重组肠激酶|产品简介】
酶切位点:肠激酶可以切割含有四个天冬氨酸的赖氨酸羧基端肽键:天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 赖氨酸(DDDDK)。
氨基酸序列:雅心重组牛肠激酶是一种高纯度的重组牛肠激酶轻链片段,氨基酸序列与牛肠激酶轻链一致。
酶学性质:肠激酶可去除位于蛋白质N-末端的融合蛋白,以除去不需要的融合标签。
基本特性:该酶经HPLC纯化,纯度高,特异性高,不含其他蛋白酶,可以在较宽pH范围(4.5-9.5)和较宽温度范围内有效切割融合蛋白。
【重组肠激酶|产品特性】
来源 | 重组大肠杆菌 |
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产品外观 | 澄清、无色至淡黄色液体 |
活性 | ≥ 5.0 U/µl |
纯度(蛋白电泳) | 单一主条带 |
分子量(蛋白电泳) | 25.8 ±2.6kDa |
【重组肠激酶|使用方法】
备注:1U定义为在25℃,12h~16h之内,将0.5mg保存于25mM Tris-HCl 8.0 缓冲液中的融合蛋白切割95%所需的酶量。
25℃酶切条件:
反应体系:
反应条件:25℃过夜酶切,或完全酶切需16-24h,用SDS-PAGE检测酶切效果。
结果验证:使用0.1 U本品酶切50 ug融合蛋白底物,反应温度是25℃,酶切不同时间梯度(8 h,16 h,24 h,40 h,48 h,64 h)
4℃低温酶切条件:4℃能对底物进行有效酶切,但需要将酶切时间延长至 48-64h,或增加 2-3 倍酶量。
酶切结果验证:使用0.1 U本品酶切50 ug融合蛋白底物,反应温度是4℃,酶切不同时间梯度(8 h,16 h,24 h,40 h,48 h,64 h)
酶切优化和放大:
优化:可以对酶切条件进行优化,例如缓冲液 pH,融合蛋白浓度,EK的量,以及酶切时间,使融合蛋白能在稳定条件下被酶切,用 SDS-PAGE 检测酶切效果。
放大:选择优化后的反应条件,按该条件等比例放大,用 SDS-PAGE 检测酶切效果。
去除重组肠激酶的方法:使用胰蛋白酶抑制剂亲和层析(例如 sigma T0637)去除重组肠激酶。
【重组肠激酶|储存运输】
储存稳定性:-20℃下,12个月稳定;25℃,一周内,无活性损失。缓冲体系:50mM Tris-HCl,pH8.0,250 mM NaCl,2 mM Ca 2+,50%甘油。反复冻融5次,无活性损失。
运输稳定性:蓝冰保温运输,活性稳定。
【重组肠激酶|产品优势】
特异性:特定的蛋白酶,切割前面含有四个天冬氨酸的赖氨酸羧基端位点:天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-赖氨酸(DDDDK)。
无动物源性:重组生产,无外源性的病毒污染,生产过程不使用任何动物源原料。
质量稳定:批量生产,可保证稳定连续的批次生产;产品批次间无差异,质量稳定。
纯度高:不含其他蛋白酶,无非特异性切割。
符合法规要求:生产设备和生产环境符合相关法规要求,生产过程完全遵循NSF ISO 9001:2015质量体系并符合GMP指导原则。
质量文件完整:按客户需求,可提供相关法规支持文件。
【重组肠激酶|注意事项】
酶切温度:不建议37℃条件下酶切,可能会有非特异性酶切出现。
酶切条件:在>200mM 咪唑,或>200mMNaCl,或>5%甘油条件下,酶切效果受影响,可参照以下推荐方法进行酶切:
推荐方法:为获得理想酶切结果,请将样品透析到25mM Tris-HCl 8.0缓冲液中,再进行酶切。若不便透析,可将样品稀释到咪唑含量在100mM以下,NaCl浓度在50mM以下,甘油浓度小于5%以下进行酶切,酶的用量与蛋白的比例不变(即1U酶切500µg蛋白)。
如果样品溶液中含有上述成分中的一种或多种,且不便去除,此时适当增加酶量或延长酶切时间,也可达到较好酶切效果。
磷酸盐的影响:磷酸盐对Enterokinase有很强的抑制作用,痕量的磷酸盐都会严重影响Enterokinase的活性,因此在酶切体系内不能存在磷酸盐。
去除肠激酶:本品是具有高酶活力重组肠激酶,切割蛋白使用量少,可不考虑除去。后续如需去除重组肠激酶,可用阴离子交换树脂(eg.DEAE-FF)对其进行洗脱。推荐洗脱条件如下:
平衡缓冲液:25 mM Tris-HCl pH 8.0
洗脱缓冲液:25 mM Tris-HCl pH 8.0,含100 mM NaCl
酶切效果:蛋白酶切效果不好,可适当增加酶量,或适当延长酶切时间。
【重组肠激酶|相关产品】
重组羧肽酶B;序列分析纯胰蛋白酶;重组人胰蛋白酶;重组抑肽酶。