一、实验目的
比较雅心重组抑肽酶(货号RTI16,批号:RTI161101)与sigma抑肽酶(货号A1153, 批号:SLBP2656V )在比活性、吸光度、酸度、纯度等方面的异同。
二、实验方法
1、蛋白含量、比活性、吸光度测定,酸度检测
称取一定量的两种酶的粉末,分别用纯水溶解,配制成2.5mg/ml的酶液 ,按照吸光系数法测定蛋白含量,其中A280nm,1cm(1mg/ml)=0.84,活性测定按照SOP操作,计算比活性。将酶液稀释成3EPU/ml,277nm下测定吸光度,要求不大于0.8。测定酶液的酸度。
2、HPLC纯度测定
①选择分子筛分析柱为TSK-GEL G2000SWXL
②该柱子的pH范围为2.5-7.5,速度范围为0.5-1.0ml/min(最高可为1.2),温度范围10-30℃,洗脱液盐浓度小于0.5M
③检测波长280nm
④根据以上两点设计方法如下表:
方法 |
pH |
流速ml/min |
温度℃ |
分子筛 |
5.8 |
1 |
25 |
⑤其他方法按照液相SOP进行操作
⑥上样量均是20ug
⑦样品处理:纯水溶解冻干粉
三、实验结果
1、蛋白含量、比活性、吸光度和酸度
|
蛋白含量 |
比活性EPU/mg |
吸光度 |
酸度pH |
雅心RTI |
72% |
3.71 |
0.505 |
5.0-7.0 |
Sigma抑肽酶 |
76.9% |
3.56 |
0.526 |
5.0-7.0 |
2、HPLC纯度
①雅心重组抑肽酶(RTI161101)
②sigma提取抑肽酶(货号A1153,lot number:SLBP2656V)
四、实验结论
1.两种蛋白在蛋白含量、比活性、吸光度和酸度方面都基本一致,其中雅心重组抑肽酶(RTI161101)比活性略高于sigma抑肽酶(A1153)。
2.HPLC纯度:雅心重组抑肽酶(RTI161101)比sigma抑肽酶(A1153)峰形更集中,两者纯度均为100%。