雅心重组抑肽酶(RTI16)与sigma提取抑肽酶(A1153)比较

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一、实验目的

比较雅心重组抑肽酶(货号RTI16,批号:RTI161101)与sigma抑肽酶(货号A1153, 批号:SLBP2656V )在比活性、吸光度、酸度、纯度等方面的异同。

二、实验方法

1、蛋白含量、比活性、吸光度测定,酸度检测

称取一定量的两种酶的粉末,分别用纯水溶解,配制成2.5mg/ml的酶液 ,按照吸光系数法测定蛋白含量,其中A280nm,1cm(1mg/ml)=0.84,活性测定按照SOP操作,计算比活性。将酶液稀释成3EPU/ml,277nm下测定吸光度,要求不大于0.8。测定酶液的酸度。

2、HPLC纯度测定

①选择分子筛分析柱为TSK-GEL G2000SWXL

②该柱子的pH范围为2.5-7.5,速度范围为0.5-1.0ml/min(最高可为1.2),温度范围10-30℃,洗脱液盐浓度小于0.5M

③检测波长280nm

④根据以上两点设计方法如下表:

方法

pH

流速ml/min

温度℃

分子筛

5.8

1

25

⑤其他方法按照液相SOP进行操作

⑥上样量均是20ug

⑦样品处理:纯水溶解冻干粉

三、实验结果

1、蛋白含量、比活性、吸光度和酸度

 

蛋白含量

比活性EPU/mg

吸光度

酸度pH

雅心RTI

72%

3.71

0.505

5.0-7.0

Sigma抑肽酶

76.9%

3.56

0.526

5.0-7.0

2、HPLC纯度

①雅心重组抑肽酶(RTI161101)

②sigma提取抑肽酶(货号A1153,lot number:SLBP2656V)

 

四、实验结论

1.两种蛋白在蛋白含量、比活性、吸光度和酸度方面都基本一致,其中雅心重组抑肽酶(RTI161101)比活性略高于sigma抑肽酶(A1153)。

2.HPLC纯度:雅心重组抑肽酶(RTI161101)比sigma抑肽酶(A1153)峰形更集中,两者纯度均为100%。

2024年10月21日 11:48
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