一、实验目的
1.测定sigma公司的trypsin-EDTA细胞消化液的活性。
2.用重组抑肽酶抑制trypsin-EDTA细胞消化液中trypsin活性达完全所需的抑肽酶的量。
二、实验材料
1) Trypsin-EDTA solution , sigma T4049-100ml Lot # SLBN6048V EXP Aug 17, 0.25%, sterile filtered,BioReagent, suitable for cell culture, 2.5g porcine trypsin and 0.2g EDTA per liter ofHank’s Balanced Salt Solution with phenol red.
2) RTI (recombinant aprotinin) Lot # 160301 , 5.8 EPU/mg, 21.9mg/ml。
3) 活性测定底物：BAEE溶液，按照公司标准方法配置。
4) 胰蛋白酶活性测定方法，按照公司标准方法操作。
三、实验过程及结果
1) 测定trypsin-EDTA solution的活性：4150 BAEE unit/ml,
2) 按照1EPU RTI可抑制16200 BAEE unit的胰蛋白酶活性，
计算完全抑制4150 BAEE unit/ml胰蛋白酶的RTI用量为 4150/16200=0.256 EPU。
四、具体实验如下
2.1. 取150ul trypsin-EDTA solution，总活性为622.5 BAEE unit (4150 BAEE unit/ml * 0.15)，
2.2. 计算完全抑制，所需加入RTI的体积，622.5/16200=0.0384 EPU，换算为体积为：0.0384/(5.8*21.9)=0.302ul，将RTI稀释10倍后，加入量为3.02 ul。
反应5min后，测定胰蛋白酶活性。
无活性。
结论：完全抑制
2.3. 计算50%抑制所需的加入量为1.51ul。 其他操作同2.2。
反应5min后，测定胰蛋白酶活性。
测定活性：2100BAEE unit/ml。
结论：抑制率为49.39%。
五、结论
1）1EPU RTI可完全抑制16200 BAEE unit的胰蛋白酶活性，若不完全抑制，则抑制率与加入的RTI的量成正比。
2）按照胰蛋白酶活性加入RTI (aprotinin)的量。
3）Trypsin-EDTA solution , sigma T4049-100ml Lot # SLBN6048V的活性为4150 BAEE/ml，
若达到完全抑制，每ml中加入aprotinin的量为0.256 EPU。
加入一半量的aprotinin，可抑制一半的胰蛋白酶活性。
